Первая городская клиническая больница скорой медицинской помощи

Северный государственный медицинский университет

Курс клинической лабораторной диагностики

Правила подготовки к лабораторным исследованиям крови. Условия забора капиллярной и венозной крови

Выполнила врач-интерн:

Гернет М.М.

Руководитель курса

Проф. Воробьёва Н.А.

г. Архангельск 2008 г.

Содержание

Введение

Условия забора капиллярной крови

Кровь для общего клинического анализа

Условия забора венозной крови

Преимущества системы Vacutainer

Антикоагулянт

Осложнения при взятии крови

Профилактика осложнений

Доставка, хранение и подготовка проб к исследованию

Список используемой литературы

Введение:

Соблюдение всех методик и руководств по забору венозной и капиллярной крови влияет на точность выдаваемого результата. Снижение до минимума возможных ошибок и обеспечение высокого качества гематологических исследований возможно при стандартизации преаналитического и аналитического этапа работы.

Условия забора капиллярной крови

На точность и правильность результатов оказывает влияние техника взятия крови, используемые при этом инструменты (иглы, скарификаторы и др.), пробирки, в которые осуществляется взятие, а в последующем происходит хранение и транспортировка.

Стандартизация преаналитического этапа за счет использования стандартизированных коммерческих расходных материалов для взятия, хранения и транспортировки биопроб, стандартных реактивов и диагностических систем позволяет существенно повысить достоверность и точность исследования.

Кровь для общего клинического анализа

берут у пациента из пальца, вены или из мочки уха, у новорожденных из пятки. Исследование крови рекомендуется проводить утром натощак, до физической нагрузки и различных диагностических процедур, приема лекарственных препаратов, особенно вводимых парентерально. Взятие материала следует производить в резиновых перчатках, соблюдая правила асептики. Для взятия пробы капиллярной крови Кровь для общего клинического анализа берут у пациента из пальца, вены или из мочки уха, у новорожденных - из пятки. Исследование крови рекомендуется проводить утром натощак, до физической нагрузки и различных диагностических процедур, приема лекарственных препаратов, особенно вводимых парентерально. Взятие материала следует производить в резиновых перчатках, соблюдая правила асептики. Для взятия пробы капиллярной крови используют стерильные скарификаторы-копья одноразового применения (фирма 'Гем", ЗАО Медикон ЛТД и др.) или лазерные перфораторы.

Капиллярная кровь. Перед проколом кожа пальца пациента обрабатывается стерильным тампоном, смоченным: 70° спиртом. Кожа в месте прокола должна быть сухой, розовой и теплой, кровь - свободно вытекать из ранки. Нельзя давить на палец, так как при этом в кровь попадает тканевая жидкость, что существенно искажает результаты исследования. После взятия крови к раневой поверхности прикладывается новый стерильный тампон, смоченный 70° спиртом.

Взятие крови для гематологических исследований может осуществляться 3 способами:

I. После прокола пальца несколько капель крови (не менее 3-4) спускают на индивидуальное предметное (часовое) стекло или гнездо пластикового планшета, перемешивают и используют для работы.

II. Кровь набирают индивидуальным, стерильным капилляром Панченко, предварительно смоченным цитратом натрия.

III. После прокола кожи пальца, 6-8 капель крови спускают в пластиковую пробирку с антикоагулянтом К2 ЭДТА или К3ЭДТА (трилон Б) из расчета 1,5-2,2 мг на 1 мл крови, либо в специальные пластиковые пробирки одноразового пользования, обработанных К ЭДТА (фирма Deltalab, 'Sarstedt", "Becton Dickinson" и др.). Сразу же после взятия пробу необходимо тщательно перемешать, перевернув пробирку крышкой вниз не менее 10 раз.

В случае использования 1 или 2 способа взятия крови в лаборатории заранее готовятся следующие пробирки с:

4 мл 0,9% изотонического раствора натрия хлорида для подсчета числа эритроцитов,

5 мл трансформирующего раствора для определения гемоглобина,

0,4 мл 3% раствора уксусной кислоты для подсчета числа лейкоцитов.

5% раствором трехзамещенного цитрата натрия, набранного в капилляр Панченкова до метки 50 и слитого в пробирку или коммерческие пробирки с 3,8% цитратом Na на буфере (Deltalab , Sarstedt, B&D и др.), позволяющие сохранить стабильность эритроцитов до 12 часов - для определения СОЭ.

Сразу после взятия крови в 1, 2 и 3-ю пробирки добавляют по 20 мкл крови и несколько раз промывают пипетку в верхнем слое жидкости. Исследование крови начинают с разведения для эритроцитов, так как дальнейшая работа по определению количества лейкоцитов и содержания гемоглобина связана с использованием реактивов, лидирующих эритроциты. Для определения СОЭ в капилляр, промытый цитратом натрия, дважды набирают кровь до метки 0 (100 делений) и выдувают ее в пробирку с раствором цитрата натрия (соотношение крови и реактива - 4:1), пробирку встряхивают.

Для исследования лейкоцитарной формулы, морфологии эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов готовят мазки крови: вытирают место укола сухим шариком ваты и наносят каплю крови на сухое обезжиренное предметное стекло, затем быстро готовят тонкие мазки с помощью шлифованного стекла или специального шпателя (фирмы "Гем", «А/О ЮНИМЕД»).

В педиатрии рекомендуется использовать микрометоды. После прокола капиллярная кровь помещается в специальный микрокапилляр или микропробирку, обработанные антикоагулянтом.

Условия забора венозной крови

При сдаче венозной крови желательно исключить факторы, влияющие на результаты исследований: физическое и эмоциональное напряжение, курение (за 1 час до исследования). Не следует сдавать кровь после рентгенографии, ректального исследования или физиотерапевтических процедур. Рекомендуется за 1-2 дня до предполагаемого исследования не употреблять жирную пищу и алкоголь.

Пациенту объясняют характер предстоящей процедуры. Осматривают его вены, при необходимости используя жгут. Берут шприц емкостью, соответствующей количеству крови, необходимой для анализа. Игла должна быть не меньше 22 размера, от 2.5 до 4 см длиной. На плечо накладывают «венозный» жгут. Вместо жгута можно использовать манжету сфигмоманометра под давлением средним между систолическим и диастолическим у данного пациента. Пациента просят зажать и разжать несколько раз кулак. Тщательно обрабатывают кожу в месте предполагаемого забора (обычно кубидальная вена на внутренней поверхности локтевого сгиба) 70% этиловым спиртом или другим антисептическим раствором и пунктируют вену. Иногда в сосуд сразу попасть не удается, в таком случае прокалывается кожа вблизи вены, а затем пунктируется вена. В тот момент, когда игла попадает в вену, кровь поступает в шприц. Если кровь не получена, иглу потягивают на себя, и кровь обычно начинает течь в шприц. Жгут ослабляют и просят пациента разжать кулак. После процедуры, легко нажимая кусочком стерильной ваты, вытирают место укола. Прежде чем отпустить пациента, убеждаются, что кровотечение прекратилось. У грудных детей кровь может быть получена из бедренной или наружной яремной вены. Кровь из шприца аккуратно сливают в пробирку или специальный контейнер, предварительно сняв иглу.

В последнее время для забора как венозной, так и капиллярной крови широко используются одноразовые системы, поставляемые на рынок различными фирмами. В частности, Медицинская компания «ОМБ» представляет на Российском рынке системы взятия венозной крови Vacuette производства компании Greiner Bio-one (Австрия). Всем нам хорошо известны современные требования к забору крови из вены. Выполняя эти требования, мы часто сталкиваемся с целым рядом сложностей: это и тромбирование крови в игле, и гемолиз, вызванный двукратным прохождением крови через иглу. При необходимости заполнить кровью несколько пробирок увеличивается длительность забора крови. Если планируется определение факторов свертывания, очень важно точно соблюдать соотношение кровь-антикоагулянт, что не всегда удается. Различные неопрятности случаются также и при доставке пробирок с кровью в лабораторию. Как часто мы сталкиваемся с тем, что пробирка разбилась, кровь разлилась или часть крови впиталась в ватный тампон, которым закрыта пробирка. Кроме того, несмотря на то, что персонал работает в перчатках, кровь пациента может попасть на руки. Эти и многие другие проблемы легко решаются при использовании вакуумных систем для взятия крови Vacuette. Система обеспечивает полную безопасность медицинского персонала при работе в момент взятия крови, так как полностью исключается контакт крови пациента с окружающей средой. Процедура взятия крови занимает всего 30 секунд и безболезненна для пациента. Система обеспечивает максимально точное соблюдение правил преаналитического этапа лабораторных исследований, существенно сокращая вероятность выдачи ошибочного результата. Разнообразие компонентов системы позволяет удобно и безопасно взять кровь для любых видов лабораторного анализа. Vacuette® — полностью закрытая вакуумная система для взятия крови из вены .

Система Vacuette® аналогична обычному шприцу, но вместо поршня используется перепад давлений, возникающий благодаря тому, что в пробирке создан вакуум. Система максимально удобна в обращении и обеспечивает полную защиту медицинского персонала от возможного заражения.

Кровь, взятая для получения сыворотки или плазмы, центрифугируется непосредственно в пробирке. Возможно также использование пробирок с гелем, который после центрифугирования отделяет сыворотку (плазму) от сгустка, полностью препятствуя обратному смешению.

Преимущества системы Vacutainer

Двусторонняя игла, которая обеспечивает взятие крови в несколько пробирок; предотвращает вытекание крови из вены; исключает возможность возникновения остаточных болей после венепункции; облегчает скольжение иглы внутри тканей, уменьшая дискомфорт для пациента.

Пробка Hemogard обеспечивает максимальную защиту персонала, предотвращая контакт с кровью; состоит из внутренней резиновой пробки и пластмассовой защитной крышки; обеспечивает полную герметичность; снижает риск контаминации при открывании пробки.

Стерильная пробирка Vacutainer – существуют пробирки различного объема с точной концентрацией наполнителей; антикоагулянты – цитрат натрия (синие крышки для забора на коалуграмму) (цитрата 0.5 мл), соли гепарина, калийные соли ЭДТА (пробирки с сиреневыми крышками для забора крови на ОАК): ингибиторы гликолиза – фторид натрия, йодоацетат лития (контейнеры для забора капиллярной крови на ОАК); ингибиторы тромбоцитарного фактора 4 для исследования коагуляции – ЦТАД-раствор; АЦД-раствор для определения групп крови

Антикоагулянт

Антикоагулянты требуются в большинстве гематологических исследований. Не последнюю роль играет выбор антикоагулянта. Наиболее часто используют К2ЭДТА или К3ЭДТА (дву- или трикалиевый этилендиаминтетраацетат или трилон Б), тринатрий-цитрат и гепарин. Первые два вещества ингибируют коагуляцию, связывая кальций крови; гепарин действует в качестве Ко-фактора образования комплекса тромбина с антитромбином III плазмы, в результате тромбин связывается и не переводит фибриноген в фибрин, кровь не свертывается.

ЭДТА - предпочтительный антикоагулянт при подсчете форменных элементов крови с использованием автоматических гематологических анализаторов. Концентрация ЭДТА во взятой крови должна быть постоянной и составлять 1,5 - 2,2 мг/мл крови (например, для получения соотношения 1,5 мг/мл в пробирку, рассчитанную на 2 мл крови, наливают 0,04 мл 7,5% раствора К, ЭДТА или К3ЭДТА). Недостаток антикоагулянта приводит к микросвертыванию крови и образованию сгустка, избыток - является причиной роста осмотического давления крови и сморщивания клеток. Изменение концентрации антикоагулянта от измерения к измерению могут вызвать неконтролируемые отклонения исследуемых параметров крови связанных, прежде всего, с объемом эритроцитов и тромбоцитов. У некоторых пациентов может наблюдаться небольшая спонтанная агрегация тромбоцитов или реже, так называемая ЭДТА-зависимая псевдотромбоцитопепия (иммунного характера). Использование Na, ЭДТА не рекомендуется вследствие его плохой растворимости в крови.

Гепарин - лучший антикоагулянт для определения осмотической резистентности эритроцитов и функциональных исследований лейкоцитов, включая ряд тестов с иммунологическими маркерами. Особенностью действия этого антикоагулянта является способность максимально предотвращать гемолиз. Мазки, приготовленные из гепаринизированной крови и окрашенные по Романовскому, имеют голубоватый фон.

Цитрат натрия - антикоагулянт выбора при исследованиях свертывающей системы крови и функции тромбоцитов. Применение в качестве антикоагулянтов гепарина или цитрата натрия сопровождается изменениями в структуре клеток и поэтому не рекомендуется для исследования морфологии клеток крови, кроме того, гепарин не предотвращает агрегацию клеток, поэтому его нецелесообразно использовать при подсчете лейкоцитов и тромбоцитов.

Несоответствие концентрации антикоагулянта объему взятой крови а также недостаточно тщательное смешивание может привести к значительным ошибкам, в том числе повлечь за собой неточное определение концентрации клеточных элементов, искажение морфологической структуры клеток.

Осложнения при взятии крови:

Ранние осложнения: гематома и коллапс (обморок).

Избежать гематомы можно созданием в месте прокола адекватного давления, наложив тугую повязку.

В случае обморока пациента необходимо уложить па кушетку, дать понюхать раствор нашатырного спирта и вызвать врача.

Поздние локальные осложнения: тромбоз вены, иногда может развиться тромбофлебит.

Поздние общие осложнения: заражение вирусами гепатитов В и С, вирусом иммунодефицита человека через инфицированную иглу или шприц.

Профилактика осложнений:

— если кровотечение из места прокола трудно остановить, этому участку тела придают возвышенное положение и накладывают давящую повязку. Пациента наблюдают до тех пор, пока кровотечение не прекратится;

— кровь для любых лабораторных исследований не рекомендуется брать из той конечности, в которую переливают кровь;

— у больных лейкозами, агранулоцитозом и пациентов с пониженной сопротивляемостью организма (иммунодефициты) прокол пальца или мочки уха может вызвать инфекцию скорее, чем венепункция. Если для исследования все же требуется капиллярная кровь, кожу необходимо особенно тщательно обрабатывать дезинфицирующим агентом. Этиловый спирт не является средством выбора, лучше использовать специальные антисептические растворы.

Доставка, хранение и подготовка проб к исследованию

Исследование крови необходимо проводить либо непосредственно после взятия (исключается возможность спонтанной агрегации тромбоцитов), либо спустя 25 - 240 мин (время, необходимое для адаптации тромбоцитов к антикоагулянту).

Сразу после взятия и непосредственно перед исследованием кровь должна быть тщательно перемешана вручную в течение нескольких минут для разведения антикоагулянта и равномерного распределения форменных элементов в плазме. Длительное постоянное перемешивание образцов до момента их исследований не рекомендуется вследствие возможного травмирования и распада патологических клеток.

При необходимости проведения отсроченного анализа (транспортировка на отдаленные расстояния, техническая неполадка прибора и т. д.), пробы крови хранят в холодильнике (4° - 8°С) и исследуют в течение 24 часов. Кровь нельзя замораживать. При длительном хранении происходит набухание клеток и изменение параметров, связанных с их объемом. У практически здоровых людей эти изменения не носят критического характера и не сказываются на количественных параметрах. Однако при наличии патологических клеток, последние могут изменяться или даже разрушаться вследствие апоптоза в течение нескольких часов с момента взятия крови.

Исследование крови на приборе проводится при комнатной температуре. Кровь, хранившуюся в холодильнике, необходимо согреть до комнатной температуры, так как при низкой температуре увеличивается вязкость крови, и форменные элементы имеют тенденцию к склеиванию, что в свою очередь, приводит к нарушению перемешивания и неполному лизису. Исследование холодной крови может быть причиной флагирования при трехчленной дифференцировке лейкоцитов вследствие сжатия лейкоцитарной гистограммы.

При выполнении гематологических исследований на значительном удалении от места взятия крови неизбежно возникают проблемы, связанные с неблагоприятными условиями транспортировки. Воздействие механических факторов (тряска, вибрация, перемешивание и т.д.), нарушения температурного режима, вероятность пролива и загрязнения проб могут оказывать влияние на качество анализов. Для устранения этих причин при перевозках пробирок с кровью рекомендуется использовать герметично закрытые пластиковые пробирки и специальные транспортные изотермические контейнеры.

Список используемой литературы:

Луговская С.А. и др. Лабораторная диагностика. // С.А. Луговская [Морозова В.Т.,]. – М.: Юнимед-пресс, 2002

Медицинские лабораторные технологии (в 2 томах). Том 1. под редакцией А.И. Карпищенко.

Назаренко Г.И., Кишкун А.А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. / Г.И. Назаренко [Кишкун А.А.]. – М.: Медицина, 2006.

Кишкун А.А. Руководство по лабораторным методам диагностики / А.А. Кишкун. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007.

Козинц Т.И., Макарова В.А. Исследование системы крови в клинической практике. / Т.И. Козинц [Макарова В.А.]. – М.: Триада-Х, 1998.

Луговская С.А., Морозова В.Т., Почтарь М.Е., Долгов В.В. Лабораторная гематология./ М.: Юнимед-пресс, 2002