Федеральное агентство по здравоохранению
и социальному развитию
Ставропольская государственная
медицинская академия
Факультет последипломного образования
Реферат
Тема: Исследование отделяемого женских половых органов
Научный руководитель:
д. м. н., профессор
Первушин
Выполнила:
Курсант цикла
"Клиническая лабораторная диагностика "
Бороздина И.Б.
Ставрополь, 2008 г.
Содержание
Глава I. Теоретические основы исследования отделяемого женских половых органов
Введение
Гинекологическое исследование - совокупность методов исследования, с помощью которых определяют анатомо-функциональное состояние половой сферы и выявляют заболевания половых органов.
Актуальность проблемы исследования гинекологических мазков вызвано тем, что рак тела и шейки матки по частоте занимают одно из первых мест среди злокачественных новообразований у женщин.
В настоящее время во всех экономически развитых странах отмечается уменьшение заболеваемости раком шейки матки. Основное направление борьбы с этим заболеванием заключается в активном его выявлении при массовых профилактических осмотрах практически здоровых женщин, а также своевременная диагностика и рациональное лечение фоновых и предраковых заболеваний шейки матки, что осуществляется в женских смотровых кабинетах и женских консультациях.
Смотровой женский кабинет входит в состав отделения профилактики. Задачами кабинета являются осуществление профилактического осмотра женщин с 18 лет с целью раннего выявления гинекологических заболеваний, предопухолевых и раковых заболеваний женских половых органов и других видимых локализаций (кожи, молочных желёз).
Активное выявление онкологических больных особенно с начальными формами рака в доклинической стадии болезни является основным принципом гинекологии и онкологии.
С позиций активного выявления дисплазий и раннего рака шейки матки важнейшее значение приобретает организационные вопросы проведения массовых гинекологических осмотров, одним из которых является рациональная организация цитологической службы, призванной обеспечить максимальную эффективность осмотров путём проведения цитологических исследований у каждой осмотренной женщины.
Проведение массовых гинекологических профилактических осмотров включает в себя 2 основные задачи:
Ранние и своевременные выявления рака шейки матки, в том числе и в доклинической стадии процесса.
Определение различных неопухолевых заболеваний, требующих активного лечения.
Выполнение указанных задач ведёт к снижению заболеваемости раком, уменьшению числа запущенных форм и улучшению результатов лечения.
Профилактические осмотры женщин проводятся не реже 1 раза в год акушеркой или врачом - гинекологом смотровых кабинетах при поликлиниках, на предприятиях, а также при диспансеризации лиц, работающих в условиях профессиональной вредности.
Глава I. Теоретические основы исследования отделяемого женских половых органов
Материалом для исследования чаще всего служат отделяемое влагалища, мазки с поверхности шейки матки, мазки из цервикального канала и отсосы из полости матки.
Исследуют также мазки - отпечатки, соскобы со слизистой оболочки женских половых органов.
Исследование может проводиться в динамике как в стационарных, так и в лабораторных условиях.
Приготовление и окраска препаратов.
Мазки берут из верхне-боковой части свода влагалища. Свободно отторгающийся материал наносят на край предметного стекла и лёгким движением размазывают ребром другого шлифованного стекла.
Перед окраской мазок просушивают на воздухе.
В качестве фиксатора используют 96° этиловый спирт, смесь Никифорова, состоящей из равных частей 96° этилового спирта и эфира, раствор Лейшмана (состоящим из 1 л. метанола и 2, 5 г. краски Лейшмана), а также фиксируют над пламенем горелки.
Окраска мазков. Существуют мономорфные и полиморфные методы окраски мазков.
При полиморфных методах окраски клетки, в зависимости от их типа и физико-химических свойств цитоплазмы, окрашиваются дифференцированно в красно - оранжевый или сине - зелёный цвета.
Мономорфные методы.
Окраска гематоксилин - эозином. Мазок подсушивают на воздухе, фиксируют в смеси Никифорова или в 96° этиловом спирте в течение 7 - 10 мин. Затем окрашивают водным раствором гематоксилина (гематоксилин - 1, 0 г., калийные квасцы - 50, 0 г., йодид натрия - 0, 2 г., дистиллированная вода - 1000 мл. Раствор выдерживают на свету 14 дней, после чего он готов к употреблению). В течение 7 - 10 мин до получения слабо - фиолетового окрашивания. Далее мазок промывают проточной водой и окрашивают 0, 3% спиртовым раствором желтоватого эозина или 1% водным раствором эозина в течение 1 минуты. Затем снова промывают проточной водой и высушивают.
Окраска метиленовым синим. На подсушенный препарат наносят 1 - 2 кап.1% водного раствора метиленового синего и накрывают его покровным стеклом. Через 1 - 2 мин препарат промывают дистиллированной водой до обесцвечивания, которое производится следующим образом: на один край мазка наносят 1 - 2 капли дистиллированной воды, а к другому подносят фильтровальную бумагу. Затем высушивают и микроскопируют.
Окраска фуксином. На подсушенный препарат наносят на 1 мин. Раствор фуксина (3 г. фуксина растворяют в 1 л.96° спирта и к 12 мл. этого раствора добавляют 100 мл дистиллированной воды). Затем промывают водой, просушивают и микроскопируют.
Методика окраски по Лейшману. Высушенные на воздухе препараты заливают краской Лейшмана на 3 мин., при этом препарат одновременно фиксируется. После этого промывают водопроводной водой и заливают азур - эозиновой смесью (40 мл.0, 1% азура II и 30 мл.0, 1% эозина К) на 15 - 20 мин. Затем промывают водопроводной водой, высушивают на воздухе и микроскопируют.
Методика окраски по Романовскому. Фиксированные 96° спиртом или смесью Никифорова мазки заливают рабочим раствором краски Романовского - Гимзы на 20 - 25 мин. Затем промывают проточной водой и высушивают.
Полихромные методы.
Окраска по Папаниколау. Мазки фиксируют в смеси Никифорова 25 мин., после чего проводят их через серию спиртов, понижающей концентрации: 96°, 80°, 70° и дистиллированную воду (в каждом растворе мазки следует прополоскать). Далее мазки окрашивают гематоксилином Гарриса или Боммера в течение 50 мин. Промывают в 2 сосудах с дистиллированной водой 1 - 2 секунды и дифференцируют в 3% растворе едкого аммония (1 мин). После дифференцирования мазки проводят через спирт, повышающей концентрации: 70° (дважды), 80°, 95°. Окрашивают раствором с красителем оранж G (1 мин) и проводят через 2 сосуда с 70° спиртом. Затем мазки окрашивают полихромным красителем 1, 5 минуты и проводят через 95° спирт в 3 сосудах, затем через смесь равных частей абсолютного спирта и ксилола. Через ксилол (1 мин) и помещают в канадский бальзам.
Окраска по Докумову. Влажные мазки фиксируют в течение 30 мин смесью Никифорова, после чего, не подсушивая, наливают на них гематоксилин на 2 - 3 мин, после чего сливают и промывают мазки проточной водой. Далее мазки окрашивают полихромным красителем в течение 1 - 2 минут, затем его сливают, промывают препараты 70° и 95° спиртом, высушивают и помещают в канадский бальзам.
Во время всех этапов окраски мазки не должны высыхать.
Полихромный краситель: эритрозин - 0,25 г, лихтгрюн - 0,2; фосфорно-вольфрамовая и фосфорно-молибденовая кислоты по 0,2; оранж G - 0,1 г; ледяная уксусная кислота - 1 г; этиловый спирт - 50° - 100 мл.
Раствор красителя выдерживают в течение нескольких дней для созревания.
Морфологические особенности эпителия влагалища.
В состав эпителиальных клеток отделяемого влагалища в норме, подобно гистологической структуре покровного многослойного плоского эпителия влагалища и влагалищной части шейки матки отражает состояние функции яичников.
При пролиферативной фазе многослойный плоский эпителий достигает толщины 300 - 400 мкм, имеет хорошо выраженные признаки вертикальной анизоморфности, и состоит из трёх слоёв: базального, промежуточного и поверхностного.
При секреторной фазе менструального цикла многослойный плоский эпителий имеет толщину до 200 мкм. Часть клеток функционального слоя над сосочками слущена. Гликоген обнаруживается в виде незначительных скоплений в отдельных клетках промежуточного и функционального слоёв. В подэпителиальном сосочковом слое соединительной ткани видны скопления лимфоидных клеток и гистиоцитов.
При десквамативной и регенеративной фазах наблюдается слущивание большей части клеток функционального и промежуточного слоёв. Сохраняющийся на поверхности слизистой оболочки многослойный пласт нащитывает всего 4 - 12 слоёв и толщину до 42 - 96 мкм.
У женщин, находящихся в климактерическом периоде и менопаузе, многослойный плоский эпителий подвергается атрофии.
Рассмотрим структуру клеток многослойного плоского эпителия.
Клетки поверхностного эпителия крупные (диаметром от 40 до 50 мкм), в основном полигональные, реже - округлые или овальные с чёткими границами. Ядра клеток центрально расположеные, мелкие, интенсивно окрашенные, пикнотичные, диаметром не более 6 мкм. Цитоплазма светло - голубая при окраске по Лейшману, Романовского-Гимза и обнаруживаются мелкие вакуоли.
Большое количество клеток эпителия с пикнотичными ядрами свидетельствует о высокой эстрогенной активности. Наиболее богаты мазки клетками поверхностного эпителия в поздней фолликулиновой фазе.
Клетки промежуточного слоя многослойного плоского эпителия в норме составляет не более 10%. Форма их полигональная или овальная. Диаметр клеток 25 - 30 мкм. Цитоплазма окрашена базофильно. Ядерно-цитоплазматическое соотношение увеличено. Форма ядер пузырьковидная, округлая или овальная. Хроматин нежно - сетчатый или нежно - зернистый. Клетки располагаются разрозненно и в виде пластов разной величины.
Так как под влиянием палочек Додерлейна возможен цитолиз клеток, то в мазках обнаруживаются голые ядра.
Клетки нижних рядов промежуточного слоя относятся к парабазальным и составляют не более 5% всех клеток эпителия. Они разного размера (от 12 до 30 мкм), округлой, овальной или полигональной формы. Ядра их по величине аналогичны ядрам клеток промежуточного слоя. Цитоплазма окрашена базофильно, содержит вакуоли.
Особую группу клеток промежуточного слоя эпителия составляют так называемые ладьевидные клетки. Встречаются при беременности. Форма их вытянутая, ядра располагаются эксцентрично, цитоплазма богата гликогеном и под влиянием бактерий подвергается цитолизу.
Преобладание клеток промежуточного слоя наблюдается в начале фолликулиновой и во время лютеиновой фаз, послеродовом периоде, в менопаузе, и указывает на недостаточность эстрогенных гормонов.
Увеличение количества парабазальных клеток может свидетельствовать о патологическом процессе в шейке матке.
Парабазальные клетки имеют округлую, овальную, иногда полигональную форму с чёткими границами, диаметр клеток в пределах
30 мк. Ядра имеют нежную тонкопетлистую или мелкозернистую сеть хроматина; иногда видно ядрышко. Цитоплазма резко базофильна, гликоген выявляется не всегда.
Парабазальные клетки могут обнаруживаться в мазках из влагалища в период менструации и в период менопаузы.
Базальные клетки многослойного плоского эпителия мелкие, ядерно-цитоплазматическое соотношение равно 1: 3. Ядро округлое, хроматин мелкозернистый, содержит 1 - 2 ядрышка. Цитоплазма в виде узкого ободка, резко базофильна.
В мазках здоровых женщин базальные клетки появляются только в период менопаузы. Появление в мазках значительного числа парабазальных и базальных клеток характерно для патологического процесса шейки матки.
В мазках из влагалища наряду с эпителиальными клетками могут быть и другие элементы, в частности, эритроциты, лейкоциты. Особенно много лейкоцитов выявляется после менструации. Их можно обнаружить в мазках в период менопаузы.
Эндоцервикс в норме выстлан высоким призматическим эпителием, содержащим слизь, под которым на базальной мембране находятся резервные клетки. Призматический эпителий эндоцервикса меняется в зависимости от фаз овариально-менструального цикла.
При пролиферативной фазе менструального цикла клетки призматического эпителия имеют базальное расположение ядер, наибольшая высота призматических клеток (до 30 - 36 мк ) наблюдаются при секреторной фазе. При этом ядра клеток призматического эпителия перемещаются в их центр. Отмечается гиперплазия резервных клеток с образованием солидных и железистых структур. В фазе регенерации эпителий слизистой оболочки эндоцервикса низкопризматический.
В период климакса и менопаузы отмечаются эпидермизация эндоцервикса, кистозное расширение желёз и атрофия призматического эпителия, особенно в области кист. Резервные клетки встречаются редко. Значительное число резервных клеток, выраженная их пролиферация с образованием многослойных пластов, метаплазированного многослойного плоского эпителия, новообразованием желёз отмечается в период беременности и при дисгормональных нарушениях.
При цитологическом исследовании мазков из цервикального канала обнаруживаются эпителиальные клетки слизистой оболочки разной величины. Они расположены изолированно или в виде групп железистоподобных структур, имеющих призматическую форму; овальные или круглые ядра с нежным мелкодисперсным хроматином. Цитоплазма клеток слабо базофильная, в апикальной части содержит зёрна слизи.
Наряду с клетками секреторного призматического эпителия встречаются реснитчатые клетки; реснички хорошо выражены на апикальной поверхности. В ряде случаев эпителиальные клетки в мазке располагаются не вдоль тела клетки, а поперёк. При этом клетки выглядят округлыми или полигональными, а ядра расположены центрально. В мазках могут обнаруживаться и резервные клетки призматического эпителия. Резервные клетки округлой формы, со скудной бледно окрашивающейся цитоплазмой и круглым ядром, занимающим почти всю цитоплазму. Хроматин ядра нечеткий. При исследовании мазков, взятых у женщин в секреторной фазе менструального цикла, во время беременности и при дисгормональных изменениях можно обнаружить клетки метаплазированного многослойного плоского эпителия, которые похожи на клетки многослойного плоского эпителия. Однако цитоплазма их содержит слизь или гликоген и слизь.
При беременности наряду с подобными эпителиальными элементами нередко отмечаются и децидуальные отпадающие клетки.
В мазках содержимого влагалища здоровой, зрелой в половом отношении женщины бактериальная флора обычно представлена грамположительными палочками Дедерлейна, относящимися к роду Lactobacillus.
Влагалище новорождённых примерно в половине случаев стерильно. В ближайшие часы после рождения появляется скудная кокковая флора. До наступления половой зрелости у девочек так же, как и у женщин в менопаузе, в содержимом влагалища наблюдается кокковая флора. При достижении половой зрелости (с появлением менструаций) микрофлора влагалища становится палочковидной.
В зависимости от микрофлоры и характера клеточного содержимого различают 4 степени чистоты влагалища.
Первая степень. В содержимом влагалища присутствуют палочки Дедерлейна, нередко расположенные по две рядом, и эпителиальные клетки, возможно наличие единичных лейкоцитов и слизи; рН 4,0 - 4,5. Такая картина содержимого влагалища здоровой женщины встречается редко.
Микроскопически выделения имеют вид хорошо сваренного крахмала.
Вторая степень. Палочек Дедерлейна меньше, появляется кокковая флора, наблюдаются эпителиальные клетки, часто лейкоциты, большое количество слизи; рН 5,0 - 5,5. Микроскопически выделения полужидкие, белесоватые. Подобное содержимое влагалища встречается чаще всего.
Третья степень. Незначительное количество палочек Дедерлейна, разнообразная кокковая флора (в том числе стрепто- и стафилококки), в изобилии coma variabile. Много лейкоцитов, есть эпителиальные клетки; рН 6,0 - 7,2. Макроскопически содержимое влагалища желтоватое, жидкое. Такая картина характерна для воспалительного процесса в половых органах.
Четвёртая степень. Палочки Дедерлейна отсутствуют; обнаруживается большое количество лейкоцитов, разнообразные микроорганизмы (стафило - , стрептококки, кишечные палочки, иногда трихомонады); рН свыше 7,2. Микроскопически - обильный желтый гнойный секрет, при трихомонадном кольпите пенистый. Эта степень чистоты влагалищного содержимого характерна для ярко выраженного воспалительного процесса.
Выделяют также нулевую степень чистоты, при которой микроорганизмы отсутствуют, но есть лейкоциты. Такая картина влагалищного содержимого наблюдается после лечения сульфаниламидными препаратами, антибиотиками, а также после спринцевания.
Глава II. Характеристика неспецифических и специфических фолновых процессов влагалища, шейки матки и полости матки
Исследования на трихомонады.
Трихомонады - Одноклеточные паразиты грушевидной или овальной формы, немного крупнее лейкоцитов. Один конец трихомонады заострён и имеет четыре жгутика.
Трихомонады могут обнаруживаться во влагалище женщин и девушек, в мочеиспускательном канале, мочевом пузыре и прямой кишке. Они могут присутствовать в виде цистоидных (неподвижных, без жгутиков), более устойчивых форм.
Влагалищные трихомонады патогенны, являются возбудителями вагинального кольпита, цервицита, уретрита.
При трихомониазе выделения из влагалища жидкие, беловато - желтого цвета, пенистые. Больные жалуются на зуд в области половых органов.
В нативном препарате влагалищные трихомонады обнаруживаются легко, особенно если они подвижны.
Трихомонады можно окрашивать фуксином, красителем Романовского, метиленовым синим и др. Лучше всего они окрашиваются красителем Романовского. При этом влагалищные трихомонады имеют вид овальных клеток с пенистой протоплазмой, окрашенной в голубой цвет, и бледно - фиолетовым блефаробластом.
Исследование на гонококки.
При подозрении на гонококковую инфекцию у женщин исследуют отделяемое канала шейки матки и мочеиспускательного канала. Мазок окрашивают по Грамму.
Окраска по Грамму требует особой тщательности, так как при недостаточном обесцвечивании гонококки могут сохранять окраску Грамма. При слишком длительном обесцвечивании окраску Грамма могут терять другие грамположительные кокки (стафилококки, стрептококки). Это может привести к ошибочным результатам.
Способ окраски по Грамму.
Реактивы.1. Карболовый раствор генцианвиолета.
2. Раствор люголя.
3.96° спирт.
4. Водный раствор карболового фуксина.
Ход исследования.
На фиксированный препарат кладут полоску фильтровальной бумаги и наливают раствор генцианвиолета. Красят 1,5 - 2 минуты.
Бумажку сбрасывают и заливают препарат раствором Люголя на 2 мин.
Раствор Люголя сливают и прополаскивают препарат в спирте до сероватого цвета.
Промывают водой и окрашивают водным раствором карболового фуксина.
Промывают водой, высушивают препарат на воздухе и микроскопируют.
Исследовать содержимое влагалища взрослой женщины на гонококки нецелесообразно из - за обилия бактериальной флоры. Основная локализация гонореи - мочеиспускательный канал и канал шейки матки.
У маленьких девочек вследствие незрелости плоского эпителия, покрывающего влагалище, гонококковая инфекция проявляется в виде вульвовагинита.
При микроскопическом исследовании выделений в случае острой гонореи в препарате обнаруживаются расположенные преимущественно внутри нейтрофильных гранулоцитов, сгруппированные в шахматном порядке гонококки в случае хронической - приемущественно внеклеточно расположенные.
При хронической гонорее могут появляться дегенеративные формы гонококков. В первой стадии дегенерации наблюдаются слабоокрашенные микро - и макроформы гонококков; во второй - они теряют свою типичную почковидную форму и становятся полукруглыми; в третьей - они округляются в виде шарообразных диплококков; в четвёртой стадии - сжимаются в виде отдельных точек.
Для типичной гонореи в стадии обострения характерно наличие большого количества нейтрофильных гранулоцитов; гонококки расположены как внутри их, так и внеклеточно. Другой бактериальной флоры нет.
При латентно протекающей хронической гонорее много нейтрофильных гранулоцитов. Гонококки и другие микроорганизмы отсутствуют.
Наличие большого количества нейтрофильных гранулоцитов с полуразрушенными, дегенеративно изменёнными ядрами и цитоплазмой, палочек Дедерлейна и обилие банальной микрофлоры для гонореи нехарактерно, а после её лечения может служить признаком выздоровления.
Согласно приказу МЗ СССР № 936 от 12 июля 1985 г." Об унификации лабораторных методов исследования в диагностике гонореи и трихомониаза ", используются следующие методы выявления гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале.
Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном метиленовым синим.
Реактивы.1.1% водный раствор метиленового синего;
2.96° этиловый спирт.
Оборудование: микроскоп с осветителем, песочные часы, штативы.
Приготовление препаратов. Материал наносят на чистые обезжиренные предметные стёкла тонким равномерным слоем, высушивают на воздухе.
Окраска. Препарат фиксируют 3 минуты в 96° этиловом спирте, высушивают и наносят на 1 мин 1% раствор метиленового синего, после чего тщательно смывают оставшийся краситель водой и высушивают в штативе.
Микроскопия. Исследование проводят с естественным или искусственным освещением (объектив 90 х иммерсионный, окуляр 7 х или 10 х; иммерсионное масло - кедровое).
Ядра клеток окрашены в синий цвет, протоплазма - в голубой различной интенсивности. Гонококки темно - синего цвета, резко очерчены, бобовидной формы, парные; располагаются внутриклеточно, в слизи и на эпителиоцитах.
Влагалищные трихомонады отличаются полиморфизмом (округлые, овальные, полигональные), расположены в слизи, между клеточными элементами; у них четко видна оболочка; ядро расположено эксцентрично и интенсивно окрашено в синий цвет, цитоплазма нежная, сетчатая, светло - синяя; вакуоли бесцветны.
Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном эозином и метиленовым синим.
Реактивы.1.1% раствор эозина в этиловом спирте.
2.1% водный раствор метиленового синего.
Окраска. Без предварительной фиксации препараты погружают на 10 - 15 с в 1% раствор эозина, смывают струёй водопроводной воды и заливают 1% раствором метиленового синего на 1 - 2 мин, затем тщательно смывают оставшийся краситель водой, и высушивают в штативе.
Окраска этим методом предусматривает выявление, наряду с гонококками и влагалищными трихомонадами и эозинофильных гранулоцитов.
Микроскопия. Препарат синего цвета: ядра клеток окрашены в синий, цитоплазма - в голубой цвет различной интенсивности. При наличии эозинофильных гранулоцитов в цитоплазме имеется зернистость красного или ярко - розового цвета. Слизь голубого цвета. Бактериальная флора окрашена в синий цвет различной интенсивности. Гонококки темно - синего цвета, резко очерчены, бобовидной формы, парные; располагаются внутриклеточно, в слизи и в эпителиальных клетках.
Влагалищные трихомонады: ядра овальные, синего цвета, расположены эксцентрично, цитоплазма чётко очерчена, сетчатая, светло - синяя; вакуоли бесцветные.
Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном бриллиантовым зелёным.
Реактивы.1.0,5% водный раствор бриллиантового зелёного.
2.96° этиловый спирт.
Окраска. Препарат фиксируют 3 мин в 96° этиловом спирте, высушивают, наносят 0,5% раствор бриллиантового зелёного на 1 мин. Затем тщательно смывают краситель под струёй холодной воды и высушивают в штативе.
Микроскопия. Препарат зелёного цвета: ядра клеток окрашены в зелёный цвет, цитоплазма - в светло - зелёный. Слизь зелёного цвета. Бактериальная флора окрашена в зелёный цвет различной интенсивности. Гонококки тёмно - зелёного цвета, чётко очерчены, бобовидной формы, парные, располагаются внутриклеточно, в слизи и на эпителиальных клетках. Влагалищные трихомонады с чёткой оболочкой, полиморфные (округлые, овальные, полигональные), расположены между клеточными элементами или в слизи. Ядро интенсивно окрашено в зелёный цвет, расположено эксцентрично. Цитоплазма сетчатая, светло - зелёного цвета; вакуоли бесцветные.
Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном по модифицированному способу Грамма.
Метод основан на свойстве гонококков, влагалищных трихомонад и других грамоотрицательных микроорганизмов отдавать основной фиолетовый краситель при обесцвечивании на протяжении определённого времени в этиловом спирте и на свойстве докрашиваться в дальнейшем дополнительным оранжево - красным красителем.
Реактивы.1.1% водный раствор кристаллвиолета.
2. Водный раствор Люголя.
3.96 ° этиловый спирт.
4.1% водный раствор нейтрального красного.
Окраска. Препарат покрывают фильтровальной бумагой и заливают её
1% водным раствором кристаллвиолета на 1 мин.
Для того чтобы между фильтровальной бумагой и предметным стеклом не было пузырьков воздуха, полоску фильтровальной бумаги, смоченной кристаллвиолетом, придавливают стеклянной пипеткой или палочкой к стеклу.
Через 1 минуту фильтровальную бумагу удаляют, препарат промывают струёй водопроводной воды и заливают на несколько секунд раствором Люголя до почернения мазка.
Затем остаток раствора Люголя смывают и обесцвечивают препарат в 96 ° этиловом спирте, поочерёдно погружая и вынимая препарат из спирта, находящегося в стаканчике.
Обесцвечивают препарат до тех пор, пока с его тонких участков не будут стекать фиолетовые струйки красителя и они приобретут бледно - серый цвет.
После этого препарат быстро промывают под струёй водопроводной воды и докрашивают в течение 3 мин 1% водным раствором нейтрального красного, снова тщательно промывают (пока струя воды, стекающая с него, станет прозрачной) и высушивают.
Микроскопия. При правильной окраске препарат должен иметь оранжево - красный цвет на тонких участках и лилово - фиолетовый - на толстых. Ядра клеточных элементов (лейкоцитов, эпителиальных клеток), частично удерживающих основную фиолетовую окраску, должны быть окрашены в центре в фиолетовый цвет, по переферии - в оранжево - красный, а гонококки, расположенные в лейкоцитах и на эпителиальных клетках, должны иметь оранжево - красный цвет.
Необходимое качество окраски обесцвечивается своевременным прекращения обесцвечивания препарата.
При недообесцвечивании, когда ядра клеток интенсивно окрашены в фиолетовый цвет, гонококки могут сохранять фиолетовую окраску; при переобесцвечивании, стафилококки и стрептококки могут быть окрашены в оранжево - красный цвет и приняты за гонококки.
Идентификация гонококка производится на основании его морфологических свойств, локализации и отношения к окраске по Грамму Гонококки - это парные кокки, имеющие форму кофейных зёрен, обращены друг к другу вогнутой стороной.
Размножаясь делением в различных плоскостях цепочек не образуют. Внутри лейкоцитов гонококки располагаются парами или группами таким образом, что одни из них лежат по отношению к другим под различным углом.
Внеклеточно расположенные гонококки также имеют характерные особенности. Чаще всего они в большом количестве лежат в клетках плоского эпителия рядами с расположением внутри ряда перпендикулярно друг другу. Частота внутри - и внеклеточной локализации гонококков зависит как от природы заболевания, так и от методики взятия материала. При идентификации гонококка необходимо учитывать все три его основных признака. Положительное заключение даётся при обнаружении типичных форм гонококка.
Влагалищная трихомонада окрашивается бледно: оболочка в виде тонкой полоски окружает сетчатую цитоплазму оранжево - красного цвета, ядро сиреневого или фиолетового цвета, жгутики и ундулирующая мембрана не просматривается.
Обнаружение влагалищных трихомонад в исследуемом материале при изучении нативного препарата.
Метод основан на обнаружении возбудителя в препарате по его движению среди клеточных элементов и микроорганизмов.
Реактив.1. Изотонический раствор хлорида натрия.
Приготовление препаратов. На предметное стекло наносят каплю тёплого изотонического раствора натрия хлорида и смешивают с исследуемым отделяемым с очага заболевания. Взвесь накрывают покровным стеклом и микроскопируют.
Микроскопия. Влагалищную трихомонаду определяют по грушевидной, округлой или овальной форме, небольшой величине (немного больше лейкоцита), характерными толчкообразными движениями ундулирующей мембрангы и жгутиков, которые особенно хорошо видны под микроскопии с тёмнопольным или фазовоконтрастным конденсором.
Вагинит (кольпит) - воспаление слизистой оболочки влагалища. Вызывается стрепто- и стафилококками, трихомонадами и грибками. Может возникнуть при несоблюдении правил личной гигиены при гипофункции яичников, сахарном диабете и др.
При лабораторном исследовании отмечается значительное количество дегенеративно изменённых лейкоцитов и клеток многослойного плоского эпителия.
Канидозный кольпит. Вызывается грибками рода Candida.
При лабораторном исследовании в мазках отмечается наличие большого количества лейкоцитов и утолщённых фрагментированных палочек
(грибков рода Candida ). Иногда отмечается наличие мицелия этих грибков.
Лептотрикс. Вызывается дрожжеподобными грибками.
Микроскопически в мазках внутри утолщённых фрагментированных палочек отмечается наличие красных включений.
Гарднеллёз. Вызывается гарднереллой. Диагносцируется в мазках, содержащих небольшое или умеренное количество лейкоцитов, обильной мелкой кокковой влагалищной флоры и " ключевых клеток " (клеток - ловушек), сплошь покрытых коккобактериями.
При гарднеллёзе отмечается рыбий запах вагинальных выделений при добавлении 1-2 капель 10% раствора КОН.
Вирус папилломы человека (ВПЧ).
Признаки:
Наличие койлоцитов, т.е. клеток с утолщенными краями цитоплазмы, широкой прозрачной перенуклеарной зоной и округлым гиперхромным ядром.
Двухядерных и многоядерных клеток.
Дискариоз.
Митозы.
Койлоциты нередко сочетаются с дисплазией многослойного плоского эпителия.
Хламидиоз. Вызывается хламидиями (внутриклеточные паразиты), близкие по своим свойствам к бактериям. Обнаруживаются при ИФА.
Сифилис - инфекционное заболевание, характеризующееся хроническим рецидивирующим течением с поражением всех органов и систем. Передаётся преимущественно половым путём. Возбудитель - бледная трепонема, имеющая спиралевидную форму с равномерными витками, суживающимися на концах, что делает её похожей на штопор. Она обладает активными движениями (сгибательными, поступательными, ротарными, контрактильными).
Материалом для исследования на бледную спирохету служит тканевая жидкость, отделяемое твёрдого шанкра, из эрозий, язв, папул.
Исследование производят в тёмном поле зрения.
Препарат для исследования готовят следующим образом: на предметное стекло помещают каплю физиологического раствора и такое же количество исследуемого материала. Смешивают, накрывают покровным стеклом и просматривают на тёмном фоне.
Среди фоновых процессов, связанных с гормональными нарушениями, выделяют эндоцервикозы, полипы, папилломы и простую форму лейкоплакии.
К эндоцервикозам относятся железистые эрозии, псевдоэрозии, железисто - мышечные гиперплазии.
Морфологически эндоцервикозы неоднородны, что дало основание подразделить их на простые, пролиферирующие и заживающие.
При простой форме эндоцервикоза призматический эпителий поверхности и желёз не имеет признаков пролиферации.
Пролиферирующие формы характеризуются новообразованием железистых структур за счёт гиперплазии резервных клеток. При заживающих эндоцервикозах отмечается либо рост многослойного плоского эпителия с краёв эндоцервикоза, и вытеснение призматического эпителия, либо новообразование многослойного плоского эпителия путём метаплазии из резервных клеток призматического эпителия. В мазках при эндоцервикозе могут появляться клетки призматического и многослойного плоского эпителия.
Аденоматозные полипы шейки матки по своим морфологическим признакам напоминают эндоцервикозы и по состоянию эпителия могут быть подразделены на простые, пролиферирующие и эпидермизирующие формы.
Простые формы характеризуются наличием на поверхности и в железах клеток высокого призматического эпителия с базальным расположением ядер.
При пролиферирующих формах отмечается гиперплазия резервных клеток с новообразованием желёз.
При эпидермизирующих появляются клетки метапластического многослойного плоского эпителия.
Лейкоплакия (простая форма) шейки матки является выражением прозоплазии, т е. повышения уровня дифференцировки многослойного плоского эпителия.
При простой форме лейкоплакии отмечается утолщение многослойного плоского эпителия, незначительный акантоз и разной степени выраженности гипер- и паракератоз.
Заключение
Актуальность данной темы очевидна, так как фоновые
неспецифические и специфические заболевания половой сферы являются предшественниками предраковых и раковых заболеваний женских половых органов.
Проведение массовых гинекологических осмотров призвано обеспечить максимальную эффективность осмотров путём проведения цитологических исследований у каждой осмотренной женщины, что способствует выявлению не только фоновых, но и предраковых и раковых заболеваний женских половых органов.
Это позволяет предупредить и выявить онкологические заболевания в доклинической стадии.